บทนำ
ในการสังเคราะห์สายเพปไทด์ด้วยวิธี Solid-Phase peptide Synthesis, (SSPS) ด้วยการใช้ Fmoc (9-fluorenyl methoxy carbonyl) นั้น ขั้นตอนสุดท้าย คือการตัดสายเพปไทด์ออกจากเรซิน โดยทั่วไปมักจะใช้สารละลายกรดไตรฟลูโอโรแอซีติก (TFA) เพราะว่าหมู่ปกป้อง (Protecting Group) ของหมู่โซ่ข้าง (Side Chain) จะถูกเอาออกด้วยกรด (Acid labile) จึงเป็นการทำงานเพียงขั้นตอนเดียวเพื่อตัดทั้งสายเพปไทด์ออกจากเรซินและนำ Protection Group ออกทั้งหมด มีการใส่สารจับไอออน ( Seavenger molecule) ต่างๆลงใน TFA เพื่อป้องกันไม่ให้ไอออนที่เกิดขึ้นเมื่อ Protection Group ที่หลุดออกมาจาก Side Chain กลับไปทำปฏิกิริยากับสายเพปไทด์ที่ไม่มี Protection Group
การเลือกใช้ สารจับไอออน (Seavengers) ขึ้นอยู่กับลำดับของกรดอะมิโนในสายเพปไทด์นั้นๆ สำหรับสารจับไอออนที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่
- น้ำกลั่น (เพื่อจับ t-butyl cations)
- Triisopropyl Silane, TIS (เพื่อจับ trityl และ Pbf cations)
- Ethane dithiol, EDT (เพื่อจับ t-butyl cations) ลดการเกิดปฏิกิริยาออกซิเดชั่นของหมู่โซ่ข้าง (Side Chain) กรดอะมิโน Cys/Met
- ฟีนอล (ป้องกันหมู่โซ่ข้าง กรดอะมิโน Tyr และ Trp จากออกซิเดชั่น)
- Thioanisole (ช่วยในการย้ายกลุ่มปกป้อง Pbf ออกจาก Arg (Pbf) ลดการเกิดออกซิเดชั่นของหมู่โซ่ด้านข้าง Cys/Met
ในการตัดเพปไทด์ สามารถทำได้ทั้งในอุณหภูมิห้อง ช่วง 20-38 °C
CEM แนะนำเครื่องตัดสายเพปไทด์ด้วยความร้อนแบบขนาน รุ่น Razor (Peptide Synthesis Cleavage System) สามารถตัดสายเพปไทด์ทั้งแบบสายเพปไทด์สายเดี่ยว (Single Peptide) และขนาดใหญ่
ตารางด้านล่าง แสดงตัวทำละลายที่ CEM แนะนำใช้ในขั้นตอนการตัดสายเพปไทด์ ทั้งที่อุณหภูมิห้องและอุณหภูมิสูง คำแนะนำการใช้สารละลายนี้ เหมาะสมกับการตัดสายเพปไทด์ทั่วไปรวมถึงการกำจัด Protection Group ของ Side Chain ทั้งหมดออกไปพร้อมกัน
|